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如何選擇合適的HIS標(biāo)簽抗體?這就來(lái)揭曉

更新時(shí)間:2023-06-09  |  點(diǎn)擊率:1975
  His標(biāo)簽抗體是由6個(gè)組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設(shè)計(jì)用于重組蛋白質(zhì)的吸附純化。由于分子量較小,并且較容易分離和純化,His-tag 融合標(biāo)簽與其他標(biāo)簽相比有很多明顯優(yōu)勢(shì), 是目前用于純化的融合標(biāo)簽中使用最為廣泛的一種。His抗體可以用于檢測(cè)和His標(biāo)簽融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位,以及純化、定性或定量檢測(cè)His融合表達(dá)蛋白等。然而,目前商品化His-tag的單克隆抗體(mAb)種類不多, 且價(jià)格也十分昂貴。
  如何選擇合適的His標(biāo)簽抗體?
  我們?cè)谶x擇His抗體時(shí),主要根據(jù)自己的需要,特別是實(shí)驗(yàn)應(yīng)用上的需要。其中需要考慮的因素包括了,His抗體的應(yīng)用檢測(cè)類型、His抗體的克隆性及制備來(lái)源等。比如該His抗體是否能用于Western Bloting的檢測(cè)?是否可以用于免疫熒光IF實(shí)驗(yàn)?我是否需要特異性更好的單克隆His標(biāo)簽抗體?我是否需要考慮下是選擇小鼠來(lái)源的還是兔來(lái)源的His抗體?
  一般來(lái)說(shuō),應(yīng)用類型越多,在使用過(guò)程中的選擇余地就越大,而小鼠源的單克隆抗體一般在特異性、穩(wěn)定性以及效價(jià)都要優(yōu)于多克隆抗體。 另外,抗體的效價(jià)也是考察該抗體性價(jià)比的重要方面,也即相當(dāng)于實(shí)際應(yīng)用時(shí)的稀釋比率。一個(gè)效價(jià)高的100μl His抗體(假如其WB檢測(cè)的稀釋比率是1:5,000,最終使用液相當(dāng)于500ml),要比效價(jià)低的1ml的His抗體(假如WB檢測(cè)的稀釋比率是 1:200,最終使用液相當(dāng)于2ml)性價(jià)比更高。因此在選擇His標(biāo)簽抗體的時(shí)候,不但需要考慮抗體的量,還需要考慮抗體的效價(jià),即不同應(yīng)用的建議稀釋比率。
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