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淺析細胞凋亡試劑盒使用注意事項

更新時間:2023-06-09  |  點擊率:916
  細胞凋亡試劑盒是用FITC標記的重組人Annexin V來檢測細胞凋亡時出現(xiàn)在細胞膜表面的磷脂酰絲氨酸的一種細胞凋亡試劑盒??梢允褂昧魇郊毎麅x、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設備進行檢測。
  細胞凋亡是指細胞在生長到一定階段及某些生理過程中,會受到多因素和機制的嚴格調(diào)控而進入死亡。這是一個動態(tài)的過程,會涉及一系列復雜的生化反應, 是一個需要酶參與的級聯(lián)反應,同時也涉及不同基因的表達及調(diào)控、信號傳導。其中有幾項生理過程能被用來檢測凋亡的發(fā)生,因此多參數(shù)分析法對于準確檢測這一過程十分重要。同時,了解細胞死亡和存活機制也是毒理分析和藥物研發(fā)應用中一個非常關鍵的內(nèi)容。
  細胞凋亡的經(jīng)典進程:
  1.Caspase的激活在凋亡信號響應中起關鍵作用;
  2.線粒體膜電位降解;
  3.Caspase繼續(xù)引發(fā)關鍵的蛋白水解表達凋亡相關蛋白;
  4.細胞膜組成改變,作為引發(fā)凋亡細胞的內(nèi)吞作用的信號;
  5.DNA片段化,基因組的打斷是凋亡過程中-個不可逆的過程。
  注意事項:
  1.盡管經(jīng)測試細胞凋亡試劑盒反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融。
  2.如果有細菌或真菌污染,會嚴重影響檢測效果。
  3.染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
  4.如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解細胞凋亡試劑盒,導致染色失敗。
  5.熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
  6.用于流式細胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞,并且通過調(diào)整相關設置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
  7.需自備PBS。
  8.細胞凋亡試劑盒僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
  9.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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