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清楚這些內(nèi)容,使用cck8檢測試劑盒不再是難題!

更新時間:2023-06-09  |  點擊率:1137
  cck8檢測試劑盒為MTT 法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒??捎糜谒幬锖Y選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。
  使用說明:
  一、制作標準曲線(測定細胞具體數(shù)量時 (測定細胞具體數(shù)量時)
  1、先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,然后接種細胞。
  2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做 3-5 個細胞濃度梯度,每組 3-6 個復孔。
  3、接種后培養(yǎng)至細胞貼壁,然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 OD 值,制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(X 軸),OD 值為縱坐標(Y 軸)的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量(試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致,便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時間。)
  二、細胞活性檢測
  1、在 96 孔板中接種細胞懸液(100?L/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)(在 37℃,5% CO2 的條件下)。
  2、向每孔加入 10?L CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數(shù))。
  3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。
  4、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。
  5、cck8檢測試劑盒如果暫時不測定 OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
  三、細胞增值-毒性檢測
  1、在 96 孔板中配置 100  µL的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng) 24 小時(在 37 ℃,5% CO2 的條件下)。
  2、向培養(yǎng)板加入 10 µL不同濃度的待測物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間(例如:6、12、24 或 48 小時)。
  3、向每孔加入 10  µLCCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數(shù))。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。
  4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。
  5、用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。
  6、cck8檢測試劑盒如果暫時不測定 OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
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